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一、方案背景与目标

新鲜农产品的游离氨基酸特征谱可反映其营养价值（如支链氨基酸助力运动后恢复）与风味特征（如 L - 谷氨酸呈鲜味、L - 甘氨酸呈甜味），是育种项目关注的核心性状。本方案旨在提供一种无需衍生化、样品制备简单的 LC/MS/MS 方法，实现番茄匀浆中游离氨基酸的精准定量分析。

二、核心仪器与试剂

1. 仪器设备

分析系统：EClassical 3200L 高效液相色谱仪 + MS2 Vertical 9100 三重四极杆质谱仪

控制与数据处理软件：Simplicity? M 3Q 软件平台

辅助设备：3kDa 过滤器、离心机、Triple Red 水纯化仪

2. 主要试剂

乙腈、甲酸、氨基酸标准品、氘化氨基酸标准品（内标）、去离子水（由 Triple Red 水纯化仪制备）

三、实验流程

1. 方法转移与参数优化

将 Syngenta 氨基酸含量测定内部方法直接转移至 EClassical 3200L 系统，无需修改；通过注入高浓度标准溶液（L1 级），优化 MS/MS 离子对的入口电压与碰撞能量。

2. 校准曲线制备

配制 7 点校准曲线，包含多种浓度的目标氨基酸与固定浓度的氘化内标（内标浓度见表 1）；

内标种类：2,3,3,3-d4 - 丙氨酸、柠檬酸 - 2,2,4,4-d4、DL - 谷氨酸 - 2,3,3,4,4-d5、DL-d5 - 苯丙氨酸等。

3. 样品前处理

番茄样品匀浆后离心，取上清液；

用 3kDa 过滤器过滤上清液，所得液体用去离子水稀释 400 倍（确保浓度在校准范围内）；

加入与校准标准品同水平的氘化内标。

4. 分析参数设置

LC 参数：柱温 30℃；流动相 A 为 “水 + 0.2% 甲酸”，流动相 B 为 “乙腈 + 2% 水 + 0.2% 甲酸”；梯度洗脱程序按时间调整流速与 A/B 比例（详见表 2）；

质谱参数：ESI 离子源（正电压 5500V、负电压 - 4000V），离子源温度 315℃，HSID 温度 200℃，干燥气 60，雾化气 350；各氨基酸离子对与碰撞能量见表 3。

四、方案结果

分离与灵敏度：该方法可实现不同游离氨基酸的良好色谱分离，MS2 Vertical 9100 质谱检测器灵敏度高，能精准捕捉目标化合物信号；

线性与检出限：所有氨基酸线性相关系数 R2 均 > 0.98（部分如天门冬酰胺 R2=0.999），LOQ（定量限）低（低 0.005μg/mL，如组氨酸、甜菜碱、脯氨酸等），满足微量分析需求（详见表 5）；

代表性数据：天门冬酰胺、丝氨酸等氨基酸的校准曲线线性优异（见图 1），不同浓度校准品与番茄样品的色谱图重叠度高，分离效果清晰（见图 2）。

五、方案结论

Syngenta 内部方法可直接转移至依利特 EClassical 3200L-MS2 Vertical 9100 系统，无需修改，适用性强；

方法无需对游离氨基酸进行衍生化，样品前处理简单、效率高；

所有目标化合物检测选择性好、灵敏度高、线性关系优异，可高效用于番茄匀浆中游离氨基酸的定量分析。

注：更多详情（含完整表格 1-5、谱图数据）请下载 PDF 文件查看。